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水產(chǎn)品獸藥殘留快速分析

[2010/6/4]

 

水產(chǎn)品獸藥殘留快速分析

1 水產(chǎn)品藥殘概論

藥物在預(yù)防、治療水產(chǎn)疾病中起到積極作用,但同時又帶來了藥物殘留(簡稱藥殘)問題。目前,水產(chǎn)品藥物殘留問題日益嚴重,它不僅對人體健康造成潛在危害,而且還影響著水產(chǎn)品進出口貿(mào)易,已成為出口貿(mào)易的瓶頸,因此加強水產(chǎn)品藥物殘留監(jiān)管,提高水產(chǎn)品質(zhì)量安全已是刻不容緩。

1.         水產(chǎn)品藥物殘留的定義

水產(chǎn)品藥物殘留是指對人體健康產(chǎn)生重大影響的,在水產(chǎn)品的任何食用部分中,藥物的原型化合物或者其代謝產(chǎn)物,及與藥物本體有關(guān)雜質(zhì)的殘留。主要的殘留藥物有消毒劑、驅(qū)殺蟲劑、抗菌藥(抗生素、磺胺類、呋喃類)、激素類、基因誘導劑、疫苗等。

2  水產(chǎn)品藥物殘留對人體的危害

對于大多數(shù)人們來說,主要是通過食用帶有殘留獸藥的水產(chǎn)食品,這種接觸幾乎每天都有,是長期的。水產(chǎn)品藥物殘留對人體的危害主要有以下幾個方面:

(1)       人類細菌耐藥性增加

   目前漁用抗菌藥物使用范圍和劑量的日益擴大,抗菌藥藥性殘留于水產(chǎn)動物食品中,同樣使人長期與藥物接觸,導致人體現(xiàn)人耐藥菌的增加,耐藥性的增強,F(xiàn)已研究證實細菌的耐藥性可以通過耐藥質(zhì)粒在人群中細菌、動物群中細菌和生態(tài)系統(tǒng)中細菌間相互傳遞,導致致病菌產(chǎn)生耐藥性。

  2)毒性損傷

藥物殘留可通過食物鏈長期富集而對人體造成一定程度的損傷。如:硝酸亞汞、甘汞等制品對魚類小瓜蟲的治療效果好,但其在魚體內(nèi)易富集、殘留,當人攝入后可引起腎損傷,表現(xiàn)為變性和壞死,引起腎功能降低。一些抗生素的長期使用和濫用在水產(chǎn)動物產(chǎn)品的殘留也會造成一些潛在的危害。如:氯霉素可抑制骨髓造血功能,引起再生障礙性貧血和粒細胞缺乏癥;呋喃唑酮可引起溶血性貧血、多發(fā)性神經(jīng)炎和急性肝壞死等;四環(huán)素類可抑制幼兒牙發(fā)育和骨骼生長;鏈霉素等氨基糖甙類抗生素損傷聽神經(jīng)和腎功能。

3過敏反應(yīng)或變態(tài)反應(yīng)

   磺胺類、四環(huán)素類、喹諾酮類和某些基糖甙類抗生素等藥物殘留于水產(chǎn)動物性產(chǎn)品中進入人體后,就使得敏感個體致敏,產(chǎn)生抗體。當這些被致敏的個體再次接觸這些抗生素時,則這些抗生素會與抗體結(jié)合生成抗原抗體復(fù)合物,激活體內(nèi)肥大細胞和嗜堿性粒細胞,釋放組胺、ECF-A、LTS、PGPAF等物質(zhì)刺激,集體出現(xiàn)平滑肌痙攣、身管擴張、微血管通透性增加、組織水腫、粘膜腺體分泌等病理損傷。過敏反應(yīng)或變在臨床上輕者可表現(xiàn)為有瘙癢的蕁麻疹、惡心嘔吐、腹痛腹瀉,重者表現(xiàn)為血壓急劇下降、迅速引起過敏性休克,甚至死亡。如磺胺類藥物可引起人類的皮炎、血細胞減少、溶血性貧血和藥熱等臨床癥狀。

4)三致作用

即致癌、致畸、致突變作用。藥物及環(huán)境中的化學藥品可引起基因突變或染色體畸變而造成對人類的潛在危害。如水產(chǎn)常用促生長劑喹乙醇,現(xiàn)已證實有明顯的蓄積毒性、遺傳毒性和誘變性。長時間使用會在魚體內(nèi)殘留,而對人的健康造成潛在的威脅,因此對于喹乙醇用于水產(chǎn)的安全性需進一步評價。水產(chǎn)上常用的治療水霉病的藥物孔雀石綠,是一種強致癌物。據(jù)報道魚體短期一次接觸孔雀石綠1/15000濃度,就可致細胞突變,現(xiàn)在許多國家和組織已禁止使用。硝基呋喃類藥物(如呋喃唑酮、呋喃西林)近來的研究認為長期使用除了會對肝、腎造成損傷外,同時具有致癌作用和致畸、致突變效應(yīng)。做為水產(chǎn)上常用的消毒藥二氯異氰尿酸鈉和三氯異氰尿酸過去認為是安全、高效的消毒藥,但近來研究證實其在水體中的分解產(chǎn)物氰尿酸降解速度非常緩慢,且對人體有致癌作用。此外在水產(chǎn)上常用的殺蟲藥敵百蟲、促生長劑乙烯雌酚、砷制劑等都已證明具有致癌作用。許多國家都已禁止這些藥用于水產(chǎn)養(yǎng)殖。當人們長期食用含有三致作用藥物殘留的動物性食品時,這些殘留物便會對人體產(chǎn)生危害,或在人體內(nèi)蓄積,最終產(chǎn)生致癌、致畸、致突變作用。近年來人群中腫瘤發(fā)生率不斷升高,人們懷疑與環(huán)境污染及動物性食品中藥物殘留有一定關(guān)系。

  3  水產(chǎn)品藥物殘留控制的意義

由于水產(chǎn)養(yǎng)殖藥物殘留具有三致作用、毒性損傷、激素樣作用等危害,嚴重威脅人體健康,已成為人類的隱形殺手。近幾年我國出口的水產(chǎn)品因藥物殘留問題屢遭禁運,首先是20019月,歐盟因氯霉素殘留問題將我國出口到歐盟的凍蝦產(chǎn)品納入快速預(yù)警機制; 20023月,日本厚生省對我國出口到日本的動物源性產(chǎn)品實行嚴檢,并向我方通報從福建進口的鰻魚產(chǎn)品中檢出大量氯霉素殘留,同時公布了11種藥物的最大殘留限量。2006年上海市質(zhì)量監(jiān)督局從山東產(chǎn)的大鯪鲆中檢測出硝基呋喃類代謝物超標,全國一片嘩然。由此可見,我國從保障人民群眾健康,水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)要持續(xù)健康發(fā)展,水產(chǎn)品要進入國際市場的需要,必須嚴格控制藥物殘留。 

4  水產(chǎn)養(yǎng)殖中藥物殘留的控制措施

根據(jù)藥物在水產(chǎn)動物體內(nèi)的藥代動力學規(guī)律合理用藥。

開展多種形式的教育工作,提高全民關(guān)于水產(chǎn)動物食品安全性的整體認識,引導水產(chǎn)養(yǎng)殖者科學用藥,推廣健康養(yǎng)殖技術(shù)。

加強和完善我國漁藥殘留的監(jiān)控體系。

a.建立和完善水產(chǎn)品的安全保障體系,依法開展水產(chǎn)品無公害臨界控制的檢驗檢疫工作。

b.加強藥物殘留的方法和標準建設(shè),在標準制定中要突出水產(chǎn)品安全衛(wèi)生標準、質(zhì)量標準、漁藥使用規(guī)范、藥物殘留限量及相應(yīng)的檢測技術(shù)和檢測方法的制定。

c.加快縣市一級藥物殘留檢測機構(gòu)的建立和建設(shè),使之形成從完善的藥物殘留檢測網(wǎng)絡(luò)機構(gòu),便于開展水產(chǎn)品中藥物殘留的常規(guī)檢測,加強藥物殘留的監(jiān)控力度。

2 水產(chǎn)品藥殘分析原理

1水產(chǎn)品藥殘快速檢測的構(gòu)成要素

相應(yīng)的檢測儀器(酶標儀或?qū)I(yè)分析儀TR-300)、樣品前處理工具和檢測試劑盒。

2檢測原理

采用免疫競爭法定量。微量反應(yīng)板上包被有羊抗兔抗體,檢測時加入特異性的待檢藥殘抗體、待檢藥殘標準品或待測樣品溶液及辣根過氧化物酶標記的藥殘結(jié)合物溶液,室溫(25℃)下反應(yīng),待測藥殘標準品或樣品溶液及過氧化物酶偶聯(lián)待測藥殘結(jié)合物競爭性地與待測藥殘抗體結(jié)合,形成抗原抗體復(fù)合物。洗滌后加酶反應(yīng)底物和顯色劑,結(jié)合的酶標記物將無色的顯色劑轉(zhuǎn)化為藍色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍色變?yōu)辄S色,在450nm處測量吸光度值,樣品中的待測藥殘濃度與吸光度值成反比。

 

3 我國的分析標準

我國現(xiàn)行獸藥殘留分析的標準分兩類,一類是國家標準,一類為農(nóng)業(yè)部的檢測方法,快速分析大多為農(nóng)業(yè)部的檢測方法。

4 應(yīng)用及測試步驟

1.應(yīng)用

水產(chǎn)品藥殘快速分析主要有兩個方面的應(yīng)用,第一是為了適應(yīng)大量水產(chǎn)品的常規(guī)檢測,對于各級水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機構(gòu)需要快速檢測法,即使用快速檢測法對大量樣本進行初步篩選,再對初篩中具有超出農(nóng)業(yè)部限量的結(jié)果的樣本進行實驗室驗證,如應(yīng)用HPLC、GC、MS、HPLC-MS等進行進一步測定。第二是為了適應(yīng)隨時隨地的快速檢測,對于縣市一級的水產(chǎn)品檢測機構(gòu),漁業(yè)合作社、水產(chǎn)公司、水產(chǎn)批發(fā)市的質(zhì)量監(jiān)管部門需要快速檢測法,即在短時間內(nèi)對樣本作出判斷,將具有超出農(nóng)業(yè)部限量結(jié)果的產(chǎn)品阻止在流通環(huán)節(jié)之外。

典型用戶類型

1 海洋與漁業(yè)廳/市縣局的水產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心、水產(chǎn)種苗監(jiān)督管理站

2  衛(wèi)生廳/衛(wèi)生監(jiān)督所

3  人民政府食品辦公室

4  內(nèi)地水利水產(chǎn)局/水產(chǎn)股/漁政

5  產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所

6  出入境檢驗檢疫部門

7  食品質(zhì)量監(jiān)督檢測機構(gòu)

8  工商局流動檢測車

9  水產(chǎn)批發(fā)市場

10 農(nóng)貿(mào)市場

11 大型廠礦

12 企事業(yè)單位

13 飯店,賓館,超市

……

2 我公司關(guān)于水產(chǎn)品藥殘快速測試步驟

 1)樣品前處理(以氯酶素藥殘為例)

 

水產(chǎn)品(肉類)藥殘富集、提取器操作

------前處理氯酶素藥殘

 

一、  器具準備

1.  水產(chǎn)品(肉類)藥殘富集、提取器;

2.  離心機:4000rpm,620ml角轉(zhuǎn)子;

3.  20-200 ,100-1000μl數(shù)字可調(diào)移液槍各一支;

4.  手掌天平:100/0.01 g;

5.  組織均質(zhì)器:2000-11000轉(zhuǎn)/分;

6.  組織攪拌器:500轉(zhuǎn)/分;

7.  10 ml具蓋塑料離心管若干、20ml塑料離心管12個,50 ml若干塑料離心管4個;

8.  手術(shù)剪刀一個

9.  試劑:

   乙酸乙酯(分析純),100ml貯瓶;正已烷(分析純),100 ml貯瓶;已稀釋的組織樣品萃取劑,50 ml貯瓶。

二、組織樣品制備                                     

     稱取100g去除皮、筋膜的魚脊背肉組織,用手術(shù)剪刀按2х2cm剪成塊,放入組織均質(zhì)器中,每5秒一次,直至打成肉泥。

三、組織樣品藥殘?zhí)崛、富?span>

1.稱取1g均質(zhì)好的組織樣品于10 ml具蓋塑料離心管中,離心管置于提取架上,用移液槍吸取6000μl乙酸乙酯于離心管內(nèi),離心管上蓋。

2.在藥殘富集、提取儀上,設(shè)定倒置計時時間為5分鐘,倒入38℃左右熱水于水浴器內(nèi)1/2,超聲發(fā)生系統(tǒng)開啟,放入離心管,倒置計時時間為0時取出離心管。

3.離心管放入離心機中,2500 rpm離心8分鐘。

4.用移液槍吸取4000μl上清液于另一離心管中,置于藥殘富集、提取儀吹淋系統(tǒng)架上,吹淋管放入離心管中(注意不能接觸離心管內(nèi)液面),打開氣源發(fā)生器減壓開關(guān),調(diào)節(jié)吹淋系統(tǒng)壓力為0.0015kg,50℃恒溫吹干,過程約3分鐘。

5.移液槍吸取1000μl正已烷(分析純),溶解吹干后的離心管剩余物,超聲2分鐘,再吸取500μl已稀釋的組織樣品萃取劑加入離心管內(nèi),繼續(xù)超聲1分鐘。

6.超聲完畢的離心管放入離心機中,離心管上蓋,2500 rpm離心8分鐘,下層液相用于檢測。

樣品前處理完畢。

  2)樣品檢測

      藥殘快速分析儀操作------氯酶素藥殘

                       

一、檢測儀器操作

開啟藥殘快速分析儀,進入“藥殘快速分析”界面。

第一步 編程

 點擊“編程”,  進入編程界面,進行項目設(shè)定,點擊“下級”進入編程

1.  項目名稱和檢測編號設(shè)定,

2.  下一級“波長”單、雙波長選擇,

3.  下一級“樣品”單、雙樣和標準雙樣設(shè)定,

4.  下一級“檢測方式”設(shè)定(吸光度值,定量檢測),

5.  下一級“報告方式”設(shè)定(濃度值、正常值、稀釋倍數(shù)),

6.  下一級“孔位設(shè)置”(空白、質(zhì)控、標準孔)。 

7.  下一級 “參數(shù)輸入”(梯度標準值、單位、正常值/限量判定)

8.  編程結(jié)束,貯存。            

第二步 點擊“檢測”進入檢測界面

找到要檢測的項目和編號,進入該項目

進行檢測。

板孔設(shè)定如下(檢測雙樣)

     

            S=標準樣品      T=測試樣品

 S1

 S1-1

T1

T1-1

T9

T9-9

T17

T17-17

T25

T25-25

T33

T33-33

 S2

 S2-2

T2

T2-2

T10

T10-10

T18

T18-18

T26

T26-26

T34

T34-34

S3

S3-3

T3

T3-3

T11

T11-11

T19

T19-19

T27

T27-27

T35

T35-35

S4

S4-4

T4

T4-4

T12

T12-12

T20

T20-20

T28

T28-28

T36

T36-36

S5

S5-5

T5

T5-5

T13

T13-13

T21

T21-21

T29

T29-29

T37

T37-37

S6

S6-6

T6

T6-6

T14

T14-14

T22

T22-22

T30

T30-30

T38

T38-38

 

 

T7

T7-7

T15

T15-15

T23

T23-23

T31

T31-31

T39

T39-39

 

 

T8

T8-8

T16

T16-16

T24

T24-24

T32

T32-32

T40

T40-40

 

標板設(shè)定按圖4,根據(jù)檢測量,可全選或部分選,標板設(shè)定完畢后,待檢測操作完成后,點擊“開始”進行檢測。

二、加樣記錄準備                

待所有試劑的溫度回復(fù)至室溫(約19℃至25℃)方可使用。為了減低邊緣效應(yīng),建議在反應(yīng)過程中用標板密封膠片將標板密封。每個標準或樣品要做兩份平行試驗,并做好加樣位置的記錄。

三、檢測操作

1.用移液槍吸取標準或樣品25ul,分別加入到指定的微孔中,然后加入100ul酶標記物到每一個微孔中,用密封膠紙把反應(yīng)板蓋住。

2.左右輕敲反應(yīng)板邊緣數(shù)秒,將其置于室溫下(19℃~25℃)培養(yǎng)1小時。翻轉(zhuǎn)反應(yīng)板,使孔內(nèi)所有液體傾出。

3.吸取已稀釋的洗滌緩沖劑250300ul洗滌反應(yīng)板4次,每次洗滌時,將所有液體輕輕倒出、拍干。

4.立刻用移液槍移取125μl單組分底物/發(fā)色劑到每一孔里。完畢后,左右輕敲反應(yīng)板,將其放在避光處(約20℃至25℃)20±2分鐘。

5.加入100μl0.2M硫酸終止反應(yīng),反應(yīng)物的顏色會由藍色轉(zhuǎn)為黃色。

6.在10分鐘內(nèi),上藥殘分析儀,測定,打印結(jié)果。

5 國內(nèi)水產(chǎn)品藥殘快速檢測市場分析

   1檢測形式分析

   目前國內(nèi)水產(chǎn)品藥殘分兩種檢測形式,第一種為“兩步法”,即酶標儀法,利用醫(yī)療檢測設(shè)備酶標儀對水產(chǎn)品藥殘進行(OD值)的比色,測出OD值后,或利用電子計算器進行半對數(shù)計算,或利用試劑廠家提供的計算小軟件進行數(shù)據(jù)整理,再求反對數(shù)結(jié)果;第二種為“一步法”,即專用藥殘分析儀法,利用專用藥殘分析儀,檢測結(jié)果直接求出,并配有標準曲線圖形,相關(guān)系數(shù),回歸線性方程的斜率和截距,檢測一目了然。(對于政府部門對于水產(chǎn)品藥殘的市場管理,可設(shè)定出農(nóng)業(yè)部的限量標準,檢測結(jié)果直接顯示和判定是否超標)

   雖然有的酶標儀廠家也給出了定量計算公式,但由于檢測試劑不同,稀釋倍數(shù)不同,也沒辦法直接得出結(jié)果。

2.前處理工具分析

以往水產(chǎn)品藥殘快速檢測項目,政府或用戶招標采購后,酶標儀只做為終端機使用,最多配幾只移液器,往往忽略前處理工具的采購,二次采購需要增加德國進口均漿機,氮吹儀,震蕩器,培養(yǎng)箱等設(shè)備,增加很大成本,且儀器設(shè)備多而笨重,實現(xiàn)不了便攜現(xiàn)場檢測。

    GZTRAD水產(chǎn)品藥殘快速檢測儀的前處理采用超聲萃取技術(shù),所用設(shè)備為模塊化的藥殘快速富集提取器,前處理設(shè)備和檢測儀器集中在兩個工具箱內(nèi),可實現(xiàn)便攜現(xiàn)場檢測。

6 GZTRAD水產(chǎn)品(肉類)藥殘快速檢測儀特點

1. 見宣傳材料。

2. 定標曲線帶曲線修正功能,很大程度上避免了檢測試劑對檢測結(jié)果的影響。

3. 標準曲線的存貯,節(jié)省昂貴的檢測試劑。同一檢測試劑,最少可進行一個樣品的檢測,最多可進行84個樣品檢測,而不用再做定標曲線。

7        藥殘快速分析儀儀器維護及質(zhì)量保證

1.儀器維護

11概述

本儀器在正常使用過程中,只需正常的清潔維護即可,但以下部件經(jīng)長時間工作后,可能會出現(xiàn)失效或故障,請到指定維修點維修或請用戶在專業(yè)人員指導下進行維修。為了使儀器保持一個良好的狀態(tài),必須做好日常維護工作。

警告:儀器的維修需要專業(yè)人員操作,在維修或其他原因拆卸外殼時必須切斷電源,并且閉主機。

1.2 清潔儀器

    1)保持儀器工作環(huán)境的清潔。

2)儀器表面的清潔,可以用中性清潔和濕布擦試。

3)液晶顯示器請用柔軟的布清潔。

警告:請勿讓任何溶劑、油脂類、腐蝕性物質(zhì)接觸儀器。

1.3 儀器部件更換

1.3.1 更換保險絲

1)  關(guān)閉電源開關(guān)。

2)保險絲安裝在儀器后面電源開關(guān)旁邊的保險絲盒中,擰開保險盒十字螺釘,更換同種規(guī)格的保險絲。保險絲規(guī)格:φ5×20  250V、2A。

1.3.2 更換濾光片

濾光片經(jīng)過一段使用后,基透射率會有所下降。當下降到儀器不能正常工作時,儀器會自動給出顯示,提醒用戶及時更換。更換方法如下:打開儀器上蓋,找到濾光盤,查到失效的濾光片,取出已失效的舊片,換上新片即可。

1.3.3 更換光源燈

當光源燈損壞時,儀器也會自動給出顯示,這時可打開儀器上蓋,經(jīng)檢查確定是燈泡損壞時,拔下燈插座,用手輕輕由下向上取出燈泡,更換上新的同規(guī)格燈即可。如果更換新燈泡后,儀器仍指示有故障,請及時通知本公司專業(yè)人員前去調(diào)試。

1.4 簡單故障處理

現(xiàn)   

    

     

儀器不能啟動

電源不正常

檢查是否通電,電源插頭不否松脫,保險絲是否斷路,電源電壓是否合格。

托盤運動不正常

步進電機引線插接不良;同步帶松脫;運動部件移位卡住支,定位光耦松脫或損壞

校正傳動機構(gòu),請專業(yè)人員調(diào)整。重新檢查各聯(lián)接線,擰緊松動光耦。

自檢不正常

光系統(tǒng)故障;波長設(shè)置不對

查看光源燈是否亮,重新設(shè)置一次系統(tǒng)的波長值。

檢測結(jié)果不正確

光源燈和濾光片老化

及時更換新的光源燈和濾光片

打印機燈常閃

打印機接收故障,傳送數(shù)據(jù)出錯

關(guān)掉打印機電源,等一會再打開;更換打印控制板

 

2 質(zhì)量承諾

    從發(fā)貨之日起一年內(nèi),本儀器若因質(zhì)量問題不能正常工作,本公司將無償為用戶修理或更換元器件或更換該產(chǎn)品。對于違反規(guī)定或者用戶自拆卸導致儀器損壞,則須收取維修工本費,一年以后,本公司負責該儀器的終身維護。

 

      


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